طراحی ژن stxa موتانت (g۲۳۴e- r۱۷۰l -a۲۳۱d) شیگلا دیسانتری و بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب آن

Authors

غلامرضا اولاد

gholamreza olad تهران- دانشگاه امام حسین (ع)- مرکز تحقیقات زیست شناسی محمود تولایی

mahmod tavalaee applied biotechnological research center, baghiyatallah university of medical sciences, tehran, iran, زهیر محمد حسن

zahir mohamad hasan 3medical sciences faculty, tarbiat modaress university, tehran, iran فیروز ابراهیمی

firoz ebrahimi 1biological research center, imam hosain university, tehran, iran جعفر سلیمیان

abstract

زمینه و هدف: شیگلا دیسانتری یکی از مهمترین باکتری های بیماریزا ی روده ای انسان است. شیگاتوکسین (سم این باکتری) با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلولی می شود. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن علیه آن، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در حصول به پروتئین نوترکیب شیگاتوکسین نوع a (stxa) وجود دارد. این مطالعه با هدف بررسی و تعیین جایگاه های مناسب جهش و طراحی ژن سینتتیک زیر واحد stxa و سپس بیان و بهینه سازی آن و در نهایت بررسی روش تخلیص آن جهت مطالعات بعدی ایمنی زایی انجام شد. روش بررسی: در این مطالعه توصیفی-آزمایشگاهی پس از طراحی و تهیه ژن صناعی pet28a/stxa موتانت (g234e– r170l -a231d)، واکنش pcr جهت کنترل صحت حضور این ژن انجام گردید. پس از انتقال این وکتور به سلول میزبان bl21 de3، بیان، بهینه سازی و نهایتاً تخلیص پروتئین حاصل بررسی گردید. یافته ها: نتیجه مطالعات اولیه منجر به طراحی ژن stxa موتانت گردید. نتایج واکنش pcr با استفاده از پلاسمید سنتتیک نشان از صحت ژن مورد مطالعه داشت. پس از بیان این ژن در سلول میزبان bl21 de3، بهینه سازی آن نیز بررسی گردید. در نتیجه تولید مقادیر زیادی از این پروتئین به شکل اجسام توده ای نشان داده شد. تخلیص انکلوژن بادی و سپس محلول سازی پروتئین های مربوطه با استفاده از روش های تلفیقی صورت گرفت. نتیجه گیری: با توجه به مکانیسم اثر شیگاتوکسین و طراحی جهش های انتخابی با آرایش جدید در این ژن، پیش بینی می شود که این پروتئین بیانی، دارای اثر سمیت کمتری نسبت به سایر موتانت های قبلی داشته باشد، در نتیجه می تواند به عنوان کاندید واکسن برتر مطرح گردد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

طراحی ژن stxA موتانت (G234E- R170L -A231D) شیگلا دیسانتری و بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب آن

زمینه و هدف: شیگلا دیسانتری یکی از مهمترین باکتری های بیماریزا‌ی روده‌ای انسان است. شیگاتوکسین (سم این باکتری) با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلولی می شود. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن علیه آن، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در حصول به پروتئین نوترکیب شیگاتوکسین نوع A (stxA) وجود دارد. این مطالعه با هدف بررسی و تعیین جایگاه های مناسب جهش و طراحی ژن سینتتیک زیر واحد ...

full text

بهینه سازی و بیان ژن طراحی شده stxa واجد سه جهش هدفمند (e۱۶۷q-a۲۳۱d-g۲۳۴e) شیگلا دیسانتری و تخلیص آن

چکیده: هدف: شیگلا دیسانتری با تولید سم stx (با دو زیر واحد aوb) یکی از مهمترین باکتریهای بیماریزا ی روده ای برای انسان است. این سم با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلولی خواهد شد. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن ، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در دستیابی به پروتئین نوترکیب از نوع stxa وجود دارد.هدف از این مطالعه، طراحی ژن stxa موتانت و تولید پروتئین بیانی آن بعنوان کاند...

full text

بهینه سازی و بیان ژن طراحی شده stxA واجد سه جهش هدفمند (E167Q-A231D-G234E) شیگلا دیسانتری و تخلیص آن

چکیده: هدف: شیگلا دیسانتری با تولید سم stx (با دو زیر واحد AوB) یکی از مهمترین باکتریهای بیماریزا‌ی روده ای برای انسان است. این سم با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلولی خواهد شد. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن ، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در دستیابی به پروتئین نوترکیب از نوع stxA وجود دارد.هدف از این مطالعه، طراحی ژن stxA موتانت و تولید پروتئین بیانی آن بعنوان کاند...

full text

بهینه سازی بیان، استخراج و تخلیص ناحیه N- ترمینال ژن IpaD شیگلا دیسانتری با استفاده از آنالیز پروتئومیکسی

زمینه و هدف: باکتری شیگلا دیسانتری یکی از عوامل پاتوژن مهم است که علی‌رغم تلاش‌های چندین ساله برای تهیه واکسن علیه آن هنوز مطالعات گسترده پیرامون آن ادامه دارد. محصولات پلاسمید تهاجمی شیگلا (Ipa) نقش مهمی در تهاجم باکتری ایفا می‌کنند. پروتئین IpaD یکی از اعضای این خانواده است که به عنوان کاندید واکسن شیگلا مطرح می‌باشد. مطالعات متعدد بر روی این پروتئین نشان داده که ناحیه N- ترمینال آن نقش مهمی ...

full text

بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان (PAL) باکتری لژیونلا پنوموفیلا

  زمینه و هدف: اکثر تست های موجود برای تشخیص پنومونی لژیونلایی، با مشکلات زیادی از جمله حساسیت و ویژگی پائین و عدم توانایی در فراهم نمودن نتیجه در یک زمان کلینیکی مناسب مواجه هستند. از آنجایی که لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان ( PAL ) لژیونلا پنوموفیلا در درون ادرار ترشح شده و به عنوان یک آنتی ژن در تمام سویه های آن وجود دارد. لذا برای تشخیص بیماری لژیونر از طریق ادرار مورد توجه قرار گرفته اس...

full text

بهینه سازی بیان، تخلیص و بررسی خاصیت ضد میکروبی پروتئین نوترکیب بتا دیفنسین 2 نوتروفیل‎های گاو

زمینه و هدف: دیفنسین‎ها یکی از بزرگ‎ترین خانواده‎ی پپتید‎های ضد میکروب می‎باشند که به واسطه‎ی فعالیت بر علیه باکتری‎ها، قارچ‎ها و بسیاری از ویروس‎ها به عنوان آنتی‎بیوتیک‎های نسل جدید منفعت بسیاری دارند. هدف از این مطالعه بهینه سازی بیان، تخلیص و بررسی خاصیت ضد میکروبی پروتئین بتا دیفنسین 2 نوتروفیل‎های گاو (BNBD2) بوده است. روش بررسی: در این مطالعه‎ی تجربی-آزمایشگاهی باکتری اشرشیاکلی B‏L21(DE3...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
مجله دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد

جلد ۱۳، شماره ۵، صفحات ۹۳-۱۰۲

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023